超微量 Ca 2+–ATP 酶測(cè)試盒

(測(cè)組織、培養(yǎng)細(xì)胞)

一、試劑組成與配制：（試劑盒有效期 6 個(gè)月）

二、樣本的前處理：

1、組織的前處理：（組織勻漿上清液制備參考實(shí)驗(yàn)方法學(xué)）

準(zhǔn)確稱(chēng)取組織重量，按重量（g）：體積(mL)=1:9

的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)

械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液（即 10%

的勻漿上清液），再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%，同時(shí)

用考馬斯亮藍(lán)試劑測(cè)定組織蛋白（試劑本所有售）。如

果預(yù)試結(jié)果太高，再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度

再進(jìn)行預(yù)試后再?zèng)Q定取樣濃度。

2、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：將培養(yǎng)細(xì)胞消化，離心，棄上清，

留下層細(xì)胞，每管加 0.2～0.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)

制備成 10 7 /cm3細(xì)胞懸液，即 10 7 /mL，再進(jìn)行破碎。破

碎細(xì)胞方法有三種：①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉

碎器粉碎。③、反復(fù)凍溶 3 次（第③種方法有時(shí)會(huì)影響

酶活力）。制備好的細(xì)胞懸液不需要離心，同時(shí)用考馬

斯亮藍(lán)試劑測(cè)定組織蛋白（試劑本所有售）。再將細(xì)胞

勻漿液稀釋成不同濃度進(jìn)行預(yù)試，根據(jù)預(yù)試結(jié)果決定取

樣濃度。

[注 1]：在測(cè)試加樣前要搖勻后取樣。

[注 2]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻

漿或稀釋樣本。

[注 3]：預(yù)試結(jié)果將吸光度值（測(cè)定管吸光度值—

對(duì)照管吸光度值）控制在 0.2 左右為宜。

五、測(cè)定意義：

ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜

上的一種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳

遞方面具有重要的作用，機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下，

此酶活力發(fā)生一系列改變，另外有些遺傳疾病也與此酶

活力有關(guān)。

六、測(cè)定原理：

ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無(wú)機(jī)磷，測(cè)定無(wú)機(jī)

磷的量可判斷 ATP 酶活力的高低。

 超微量 Ca 2+–ATP 酶測(cè)試盒