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信帆生物:PCR技術(shù)服務(wù)升級!歡迎聯(lián)系!

點擊次數(shù):1223     更新時間:2016-03-08

 信帆生物:PCR技術(shù)服務(wù)升級!歡迎!

1.技術(shù)優(yōu)勢:

*靈敏度高,可以檢測低拷貝的目的基因

*高精度,PCR擴增階段包括3個階段:指數(shù)增,線性增和平臺期,96個重復(fù)指數(shù)增表現(xiàn)出高精度,而平臺期則變化差異

*定量能力強,簡單的流程就能得到高質(zhì)量的定量數(shù)據(jù)

*動力學(xué)范圍寬,可以定量9個數(shù)量級的差異,速度快,節(jié)省時間和勞力,不需要電泳檢測

*安全,使用熒光染料發(fā)光,不用EB或放射性物質(zhì),降低對實驗人員健康的威脅

*重復(fù)性好

2.服務(wù)流程

PCR引物、探針設(shè)計合成調(diào)試→標(biāo)準(zhǔn)品制作→樣本核酸抽提反轉(zhuǎn)錄→PCR擴增檢測→數(shù)據(jù)初步分析

3.檢測方法

   (1) SYBR Green Ⅰ

   游離狀態(tài)下的SYBR Green分子發(fā)出微弱的熒光信號,當(dāng)與dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合時,則發(fā)出綠色熒光,可在520nm波長下檢測熒光信號,熒光信號的強度與dsDNA數(shù)量呈正相關(guān)。

SYBR Green Ⅰ染料法的特點:

   高靈敏度,低背景信號,操作簡單,不影響酶促反應(yīng),價格便宜。

(2)探針法:TaqMan熒光探針,MGB探針

  TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針,熒光基團連接在探針的5`末端,一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等熒光基團,而淬滅劑則在3`末端,一般為TAMRA、BHQ1、BHQ2等,其中TAMRA發(fā)出黃色熒光,BHQ1和BHQ2不發(fā)出熒光。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

  TaqMan-MGB探針與普通TaqMan熒光探針相比具有更短的序列和更高的序列特異性,常被用于SNP分型的研究中,有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。

  探針法的特點:

  與染料法相比具有更低的背景信號,更高的靈敏度,可以檢測低于10個分子的模板,更高的特異性,結(jié)果也更準(zhǔn)確。同時也具有染料法的操作簡單,不影響酶促反應(yīng)等優(yōu)點。

◆核酸提取和反轉(zhuǎn)錄

根據(jù)客戶要求提取動物、植物、細(xì)胞和細(xì)菌等樣品DNA或RNA

對所提RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄以用于熒光定量PCR反應(yīng)

◆合成

設(shè)計合成各種引物并可根據(jù)客戶要求負(fù)責(zé)引物的調(diào)試

針對不同引物構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品用于定量或相對定量實驗

設(shè)計合成各種標(biāo)記探針并可根據(jù)客戶要求負(fù)責(zé)探針的調(diào)試

◆檢測

  mRNA表達(dá)檢測

   MicroRNA表達(dá)和靶基因表達(dá)檢測

   SNP檢測

   基因copy數(shù)檢測

   病原微生物樣品檢測

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